Применение полноразмерных антител в качестве радиоиммуноконъюгатов требует длительного интервала между введением и визуализацией для достижения оптимального соотношения сигнал/фон. Исследователи разработали альтернативный подход, использующий одобренные FDA рекомбинантные ферменты для расщепления линкеров радиоиммуноконъюгатов и ускорения клиренса нецелевой радиоактивности из кровотока.

Были синтезированы радиоиммуноконъюгаты на основе anti-CD20 антитела rituximab с линкерами, расщепляемыми β-глюкуронидазой, карбоксипептидазой G2 и тканевым активатором плазминогена. Хелаторы NOTA и desferrioxamine (DFO) использовались для связывания 68 Ga и 89 Zr соответственно. Радиохимическая чистота превышала 95%. In vitro эксперименты на CD20-положительных клетках Raji подтвердили интернализацию радиоиммуноконъюгатов после связывания с антигеном; после интернализации конъюгаты становились устойчивыми к ферментативному расщеплению.

Внутривенное введение карбоксипептидазы G2 и β-глюкуронидазы здоровым мышам привело к выведению примерно 50% и 70% введённой радиоактивности из кровотока соответственно. В модели подкожных ксенографтов Raji у иммунодефицитных мышей введение [ 89 Zr]DFO-methotrexate-rituximab с последующим применением карбоксипептидазы G2 повысило соотношение опухоль/кровь более чем на 40% по сравнению с контролем (физиологический раствор), что подтверждено ПЭТ-визуализацией и биодистрибуционными исследованиями.

Использование одобренных FDA ферментов для клиренса радиоактивности из циркулирующих радиоиммуноконъюгатов продемонстрировало значимую эффективность in vivo, обеспечивая proof-of-concept для будущих клинических применений, особенно при гематологических злокачественных новообразованиях. Подход может ускорить клиническую трансляцию по сравнению с транс-циклооктен-тетразиновой химией благодаря использованию уже одобренных препаратов.