Протоковая аденокарцинома поджелудочной железы (PDAC) остается одной из ведущих причин онкологической смертности. Молекулярные подтипы PDAC характеризуются амплификацией MYC (14% случаев) или его гиперэкспрессией (40%), что обеспечивает пролиферацию опухоли, метаболическое перепрограммирование и клеточную пластичность. Несмотря на связь дисрегуляции MYC с неблагоприятными клиническими исходами и резистентностью, прямое таргетирование этого онкогена остается серьезной проблемой.

Исследователи изучили эффект двойного транскрипционного ингибирования путем комбинации ингибитора BET ZEN3694 и ингибитора CDK9 SLS009 на модели пациент-специфичных органоидов (PCO) PDAC с амплификацией MYC.

Для эксперимента использовали MYC-амплифицированные органоиды (число копий = 35), которые обрабатывали ZEN3694 (500 нМ), SLS009 (200 нМ) или их комбинацией. Апоптоз и некроз оценивали через 72 часа с использованием окрашивания каспазой-3/7 и TO-PRO соответственно (циклогексимид 200 μМ служил положительным контролем). Статистический анализ выполняли методом однофакторного ANOVA с последующим post hoc тестом Тьюки.

Матрицы доза-ответ создавали для оценки синергии, жизнеспособность измеряли через 144 часа с помощью 3D CellTiter-Glo (CTG, 50% v/v). Синергию лекарственных препаратов количественно оценивали с использованием SynergyFinder 3.0 (модели ZIP, Bliss Independence, HSA). Через 24 часа выделяли белок для вестерн-блот анализа общей и Ser2/Ser5-фосфорилированной РНК-полимеразы II, MYC и MCL-1.

Индукция гибели клеток: После 72-часовой обработки монотерапией SLS009 или ZEN3694 средняя площадь окрашивания каспазой-3/7 составила 14,78% и 5,178%, а окрашивание TO-PRO — 15,68% и 5,131% соответственно. Комбинация ZEN3694 и SLS009 значительно увеличила окрашивание каспазой-3/7 до 25,65% (p<0,001) и TO-PRO до 22,84% (p<0,001).

Синергия препаратов: Двойная терапия продемонстрировала показатели синергии в диапазоне 17-21, что указывает на значительное усиление терапевтической активности по сравнению с монотерапией.

Молекулярные механизмы: Вестерн-блот анализ подтвердил целевую активность комбинации:

• Снижение фосфорилирования РНК-полимеразы II (Ser2/Ser5) (p<0,0002 и p<0,0015)
• Уменьшение T-Rpb1 (NTD) (p<0,0162), что соответствует транскрипционной паузе
• Подавление экспрессии короткоживущих факторов транскрипции MYC и MCL-1 (оба p<0,0001)

Данное исследование демонстрирует, что двойное ингибирование BET и CDK9 промотирует транскрипционную паузу и подавляет ключевые регуляторы в транскрипционно-зависимых опухолях. Важно отметить, что эти эффекты были достигнуты при использовании ZEN3694 в концентрации существенно ниже физиологических значений, что предполагает способность SLS009 потенцировать активность BET-ингибиторов.

Комбинация ZEN3694 и SLS009 продемонстрировала in vitro синергию и индуцировала как апоптоз, так и некроз при целевом транскрипционном ингибировании. Продолжающиеся исследования изучают эту комбинацию на других PDO-моделях с различными мутационными профилями. Будущие работы направлены на валидацию полученных данных in vivo для оценки терапевтической эффективности и токсичности данного подхода при MYC-амплифицированном раке поджелудочной железы.